是否有現(xiàn)貨: | 是 | 認(rèn)證: | 飛凈 Phygene |
級別: | 超純、高純 | 用途: | 實(shí)驗室 |
含量: | 標(biāo)準(zhǔn)品 | 應(yīng)用: | 科學(xué)研究 |
型號: | PH0330 | 規(guī)格: | 50ml / 100ml |
商標(biāo): | 飛凈 Phygene | 包裝: | 瓶 |
產(chǎn)量: | 2635 |
客戶自備溶液
>>漂洗緩沖液:PBS中含0.05-0.1%的Tween-20。
>>封閉液(BSA型)
>>用封閉液或PBS稀釋一抗,每個抗體的最佳稀釋度根據(jù)實(shí)驗來決定。
>>用封閉液或PBS稀釋HRP標(biāo)記的二抗,每個二抗的最佳稀釋度根據(jù)實(shí)驗來決定。
>>暗室、暗盒、X光片等曝光設(shè)備。
1. 封閉:將膜與封閉液室溫振蕩孵育60分鐘,或4℃過夜。
2. 將膜與用封閉液稀釋的一抗室溫振蕩孵育1~2小時或4℃過夜。
3. 用漂洗緩沖液洗膜2~3次,每次5分鐘。
注意:增加漂洗次數(shù)、加大漂洗緩沖液量將有助于降低背景。
4. 將膜與用封閉液稀釋的HRP標(biāo)記的二抗室溫振蕩孵育1小時。
5. 用漂洗緩沖液洗膜2~3次,每次5分鐘以除去未結(jié)合的HRP標(biāo)記的二抗。
注意:膜和二抗孵育后必須充分洗滌,以除去膜上未結(jié)合的HRP標(biāo)記的二抗。
6. 將底物試劑A和試劑B等體積混合制備底物工作液,底物工作液應(yīng)現(xiàn)用現(xiàn)配。
注意:底物試劑從4度拿出后應(yīng)平衡至室溫,經(jīng)實(shí)驗證明反應(yīng)溫度是10~50℃,最佳反應(yīng)溫度是20~37℃。每cm2膜約需0.125ml的底物工作液,為了取得最佳效果,建議使用新鮮配制的底物工作液。
7. 洗滌好的膜擺放到保鮮膜上,將底物工作液滴加到膜上,確保工作液均勻覆蓋在膜上,放置1-2分鐘。
8. 瀝去或吸去多余的工作液,覆蓋透明塑料膜保濕,隨后X光片檢測。
9. 暗室中小心地將X光片壓到膜上,先初始曝光30秒,觀察結(jié)果。改變曝光時間以取得最佳效果?;蜃鲆黄毓鈺r間梯度。
注意:發(fā)光反應(yīng)的前2-30分鐘光信號最強(qiáng),一般能持續(xù)數(shù)小時,但隨著時間延長,光信號降低。若抗原含量低、信號弱,可以適當(dāng)延長曝光時間。
*Important Note:?This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.
我們所提供的產(chǎn)品僅供科研使用,不得用于臨床診斷、治療、食品或者化妝品等用途!